原位雜交是在DNA分子復(fù)制原理的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種技術(shù)，兩條核苷酸單鏈片段，利用核酸分子單鏈之間有互補的堿基順序，通過堿基對之間非共價鍵的形成，出現(xiàn)穩(wěn)定的雙鏈區(qū)，形成雜交的雙鏈。我們?yōu)榭蛻籼峁┑奶结樉?jīng)過臨床驗證。
原位雜交是用于定位固定組織和細胞中特定核酸靶標的強大技術(shù)，能夠獲得與基因表達和遺傳位點相關(guān)的時間和空間信息。雖然
原位雜交的基本工作流程與印跡雜交近似，即核酸探針被合成、標記、純化和特異性靶標退火，但其不同之處在于前者可通過可視化顯示組織內(nèi)的結(jié)果來獲得更多信息。如今有兩種基本方法來實現(xiàn)可視化顯示原位RNA和DNA靶標，即熒光(FISH)和顯色(CISH)檢測。每種檢測方法本身的特點使得FISH和CISH適用于截然不同的應(yīng)用。雖然兩種方法均使用標記的、與樣本雜交的靶標特異性探針，但每種方法用于可視化顯示樣本的儀器不同。
原位雜交技術(shù)的基本原理是利用核酸分子單鏈之間有互補的堿基序列，將有放射性或非放射性的外源核酸(即探針)與組織、細胞或染色體上待測DNA或RNA互補配對，結(jié)合成專一的核酸雜交分子，經(jīng)一定的檢測手段將待測核酸在組織、細胞或染色體上的位置顯示出來。為顯示特定的核酸序列必須具備3個重要條件：組織、細胞或染色體的固定、具有能與特定片段互補的核苷酸序列(即探針)、有與探針結(jié)合的標記物。
原位雜交的應(yīng)用：
①細胞特異性mRNA轉(zhuǎn)錄的定位，可用于基因圖譜，基因表達和基因組進化的研究;
?、诟腥窘M織中病毒DNA/RNA的檢測和定位，如EB病毒mRNA、人類乳頭狀瘤病毒和巨細胞病毒DNA的檢測;
?、郯┗?、抑癌基因及各種功能基因在轉(zhuǎn)錄水平的表達及其變化的檢測;
④基因在染色體上的定位;
?、輽z測染色體的變化，如染色體數(shù)量異常和染色體易位等;
?、薹至验g期細胞遺傳學(xué)的研究，如遺傳病的產(chǎn)前診斷和某些遺傳病基因攜帶者的確定，某些腫瘤的診斷和生物學(xué)劑量測定等。
