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免疫熒光的注意事項分為哪幾點呢
更新時間:2021-01-21 點擊次數(shù):1338次
   免疫熒光是根據(jù)抗原抗體反應的原理,先將已知的抗原或抗體標記上熒光素制成熒光標記物,再用這種熒光抗體)作為分子探針檢查細胞或組織內(nèi)的相應抗原(或抗體)。
 
  在細胞或組織中形成的抗原抗體復合物上含有熒光素,利用熒光顯微鏡觀察標本,熒光素受激發(fā)光的照射而發(fā)出明亮的熒光,可以看見熒光所在的細胞或組織,從而確定抗原或抗體的性質(zhì)、定位,以及利用定量技術(shù)測定含量。
 
  免疫熒光注意事項
 
  1.對熒光標記的抗體的稀釋,要保證抗體的蛋白有一定的濃度,一般稀釋度不應超過1:20,抗體濃度過低,會導致產(chǎn)生的熒光過弱,影響結(jié)果的觀察。
 
  2.染色的溫度和時間需要根據(jù)各種不同的標本及抗原而變化,染色時間可以從10 min到數(shù)小時,一般30 min已足夠。染色溫度多采用室溫(25℃左右),高于37℃可加強染色效果,但對不耐熱的抗原(如流行性乙型腦炎病毒)可采用0-2℃的低溫,延長染色時間。低溫染色過夜較37℃30 min效果好的多。
 
  3.為了保證熒光染色的正確性,*試驗時需設置下述對照,以排除某些非特異性熒光染色的干擾。
 
 ?。?)標本自發(fā)熒光對照:標本加1-2滴0.01mol/L,pH7.4的PBS。
 
 ?。?)特異性對照(抑制試驗):標本加未標記的特異性抗體,再加熒光標記的特異性抗體。
 
  (3)陽性對照:已知的陽性標本加熒光標記的特異性抗體。
 
  如果標本自發(fā)熒光對照和特異性對照呈無熒光或弱熒光,陽性對照和待檢標本呈強熒光,則為特異性陽性染色。
 
  4.一般標本在高壓汞燈下照射超過3min,就有熒光減弱現(xiàn)象,經(jīng)熒光染色的標本較好在當天觀察,隨著時間的延長,熒光強度會逐漸下降。
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